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液相色谱柱的结构及使用
点击次数:657 发布时间:2018/1/3

色谱柱是运用于色谱仪系统中起着分离作用的仪器,是色谱仪分析系统的核心部件,色谱柱柱效的高低影响着检测速率的快慢以及检测结果的准确性。对色谱柱的要求是柱效高、选择性好,分析速度快。色谱柱的性质(粒度、粒径分布等)、填充料、柱长、固定相和流动相的种类等都是影响色谱柱柱效的因素。因此,为了提高色谱柱的柱效,保证液相色谱仪分析检测的灵敏性,了解液相色谱柱的结构性能尤为重要。   

     
    色谱柱空柱是由柱接头、柱管及滤片组装而成。柱接头是两端螺纹组件,采用低死体积结构,一端是7/16英寸外螺纹,另一端是3/16英寸的内螺纹 (国内外已规范化)。7/16英寸外螺纹与1/4英寸柱管(Φ6.35mm)连接,中间放置压环用于密封。3/16英寸的内螺纹与1/16英寸 (Φ1.57mm)的连接管连接,中间也放置压环用于柱接头的密封。为了尽量减少柱外死体积,提高色谱柱柱效。在安装色谱柱时,用Φ1.57mm连接管通 过空心螺钉压环后要尽量插到底,然后再拧紧空心螺钉。压环被空心螺钉挤压变形后紧箍在连接管上(连接管通过压环后露出的管长度应严格控制在2.5mm长或 其他固定尺寸)。
    在两端柱接头内,柱管两端各放置一片不锈钢滤片(或滤网),用于封堵柱填料不被流动相冲出柱外而流失。空柱各组件均为316#不锈钢材质,能耐受 一般的溶剂作用。但由于含氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性,故使用时要注意,柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂,以避免腐蚀。


    液相色谱柱的分离作用是在填料与流动相之间进行的,液相色谱柱的分类是依据填料类型而定。


    正相柱:多以硅胶为柱填料。根据外型可分为无定型和球型两种,其颗粒直径在3—10 μm的范围内。另一类正相填料是硅胶表面键合—CN,-NH2等官能团即所谓的键合相硅胶。
    反相柱:主要是以硅胶为基质,在其表面键合十八烷基官能团(ODS)的非极性填料。也有无定型和球型之分。常用的其他的反相填料还有键合C8、C4、C2、苯基等,其颗粒粒径在3—10 μm之间。
 
正相色谱柱的使用方法
1.新柱子可直接用流动相。推荐先用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积,再根据流动相选用极性相近的氯或二氯甲烷以相同的流速冲10倍柱体积,最后换成流动相;


2.正相使用时,不宜分析含醛基、羰基的化合物,不可用于还原糖的分析;流动相要彻底脱气,并不得含有羰基化合物和过氧化物(质量不好的亿醚、四氢呋喃含有少量);


3.任何时候更换流动相时都要确保新流动相与柱子原保存液可互溶。 

反相色谱柱的使用方法
1.先用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积,再依次以相同的流速相同的用量用氯、异丙醇、甲醇、甲醇-水(50:50)冲柱子;
2.以0.5ml/min的流速用30倍柱体积的pH11.0的氢氧化钠(LUNA)水溶液冲柱子(注意pH值切不可超过11.0),立即用水( 0.5ml/min的流速,30倍柱体积)冲洗,再换成流动相;
3.配制流动相时,应各组分分别量取,比例较小的组分要精密量取,需调pH值时要精密到0.1;
4.反相条件下使用时,要特别注意控制pH值范围,pH值越低越有发生水解的危险,流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。最理想的pH范围在pH 3.0-7.0;
5.如果要使用的流动相中还含有缓冲盐类,建议在用分析流动相之前,先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡,这样可避免缓冲盐在分析柱内的析出。

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